专利名称：一种海胆黄多糖荧光结合物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种海胆黄多糖荧光结合物及其制备方法和应用，属于生物医药领域。
背景技术：
糖生物学是当前生命科学研究的一大热点，香菇多糖、裂褶菌多糖、人参多糖等已作为免疫增强剂和抗肿瘤辅助药物在临床上应用，效果显著。除具广谱的免疫调节和抗肿瘤活性外，多糖还具有降胆固醇、降血糖、抗病毒等生物活性。海胆黄多糖是刘纯慧等(参见中国海洋药物，2006)首次从海胆黄(卵)中分离得到的一种结构新颖的葡聚糖，其重均分子量1.95 x 106，重复单元的结构式如下:
权利要求
1.一种海胆黄多糖荧光结合物，其特征在于是海胆黄多糖分子中葡萄糖残基上的羟基与异硫氰酸荧光素共价结合，多糖分子中葡萄糖残基修饰率为0.1% 10%，即每10 1000个葡萄糖残基结合i分子的异硫氰酸荧光素。
2.按权利要求1所述的海胆黄多糖荧光结合物，其特征在于海胆黄多糖荧光结合物中多糖分子中葡萄糖残基修饰率为0.5% 1.0%，即每100 200个葡萄糖残基结合i分子的异硫氰酸荧光素。
3.按权利要求1或2所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)将海胆黄多糖无水情况下溶解于二甲基亚砜中，加入异硫氰酸荧光素，使海胆黄多糖与异硫氰酸荧光素质量比为50:1 5:1或海胆黄多糖分子葡萄糖残基与异硫氰酸荧光素摩尔比为120:1 12:1，然后按每ioml反应体系分别加入吡啶50 1500 μ 1、二丁基锡二月桂酸i 1000 μ 1，避光于60°c 95°c下反应ih 8h ; (2)反应结束后，冷却至室温，加入4 6倍体积的无水乙醇醇沉，离心收集沉淀并真空干燥，层析纯化，然后冷冻干燥得海胆黄多糖荧光结合物。
4.按权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤(i)中所述的海胆黄多糖与异硫氰酸荧光素质量比为25:1 8:1或海胆黄多糖分子葡萄糖残基与异硫氰酸荧光素摩尔比为60: i 20: i。
5.按权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤(i)中所述的吡啶按每ioml反应体系加入100-500 μ 1，即其终浓度为1% 5% (ν/ν)。
6.按权利要求3所述的海胆 黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤(i)中所述的二丁基锡二月桂酸按每ioml反应体系加入5-100 μ 1，即其终浓度为0.05% 0.1%(ν/v)。
7.按权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的层析纯化采用的方法为超滤或凝胶过滤柱层析纯化。
8.按权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的无水乙醇加入量为5体积倍。
9.按权利要求3所述的海胆黄多糖荧光结合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中所述的醇沉温度为4°c，时间为12h。
10.按权利要求1或2所述的海胆黄多糖荧光结合物在海胆黄多糖的药代动力学、作用机制研究及质量标准制定中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种海胆黄多糖荧光结合物及其制备方法。该结合物上的葡萄糖残基与荧光素比例为120∶1～12∶1。其制备方法是以二甲基亚砜为溶剂，在吡啶、二丁基锡二月桂酸的催化下，海胆黄多糖的羟基与异硫氰酸荧光素共价结合。本发明的结合物与天然海胆黄多糖相比，不仅理化性质、结构变化较小，保留了海胆黄多糖的生物活性，而且具有荧光特性，解决了海胆黄多糖难以检测分析的缺点，可用于该活性多糖的药代动力学、作用机制研究及质量标准制定。
文档编号c09k11/06gk103087216sq20131001622
公开日2013年5月8日 申请日期2013年1月16日 优先权日2013年1月16日
发明者刘纯慧, 王凤山, 李平利, 曹吉超 申请人:山东大学