多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物的制作方法
【专利说明】多价肺炎球菌多糖一蛋白质缀合物组合物
[0001] 本申请是申请日为2006年3月31日、发明名称为"多价肺炎球菌多糖一蛋白质缀 合物组合物"的中国专利申请201210192553. 2的分案申请，而201210192553. 2是中国专利 申请200680017776. 8的分案申请。 发明领域
[0002] 本发明一般涉及医学领域，更具体地涉及微生物学、免疫学、疫苗和通过免疫预防 细菌病原体的感染。
[0003] 发明背景
[0004] 肺炎链球菌（streptococcus pneumoniae)是世界上婴儿和幼儿中脑膜炎、肺炎和 严重侵入性疾病的主要病因。多年前就批准了多价肺炎球菌多糖疫苗并且已经证明其在老 年人和高危病人中预防肺炎球菌疾病是有价值的。然而，婴儿和幼儿对多数肺炎球菌多糖 应答很弱。7价肺炎球菌缀合疫苗（7vpnc，prevnar?」是第一种表明对婴儿和幼儿中 侵入性疾病和中耳炎高度免疫原性和有效的疫苗。该疫苗现在在世界上许多国家被批准。 prevnar含有来自血清型4、68、听、14、18(：、19?和23?的荚膜多糖，每种多糖缀合到称作 crm197的载体蛋白。prevnar在美国、欧洲和世界的其他地区分别覆盖约80-90 %、60-80% 和40-80%侵入性肺炎球菌疾病（ipd) [1，2]。prevnar的引入后数年中收集的监视数据已 经清楚地表明如所预期的，在美国婴儿中侵入性肺炎球菌疾病减少（图1) [3, 4]。
[0005] 在prevnar引入前美国婴儿中进行的ib)监视表明由于血清群6和19的疾病的 大部分是由于6a(约1/3)和19a(约1/4)血清型[5, 6]。在prevnar批准后，在美国进行 的肺炎球菌侵入性疾病监视表明大部分的疾病仍然规因于血清型6a和19a (图1) [3]。此 外，这两种血清型造成比血清型1、3、5和7f总和还要多的侵入性疾病病例（100, 000个2 岁以下儿童中8. 2对3. 3例）。此外，血清型6a和19a与高比率的抗生素抗性有关（图2) [7, 8, 9]。尽管随着更多儿童被免疫，可能血清群交叉保护将导致血清型6a和19a疾病的 下降，但是有证据表明该下降将有限制，并且由于这些血清型引起的疾病的很大负担将保 持（见下文）。
[0006] 考虑到由于血清型1、3、5、6a、7f和19a的侵入性肺炎球菌疾病的相对负担和重要 性，向prevnar制剂中加入这些血清型将在美国和欧洲增加侵入性疾病的覆盖率到>90%， 在亚洲和拉丁美洲高达70% -80%。该疫苗将显著扩大prevnar的覆盖度，并且提供对6a 和19a的覆盖，其不依赖于血清群交叉保护的限制。
[0007] 发明概述
[0008] 因此，本发明一般地提供了包含13种不同的多糖一蛋白质缀合物的多价免疫原 性组合物，其中每种缀合物含有缀合到载体蛋白的来自不同血清型的肺炎链球菌的荚膜多 糖，以及生理学上可接受的载体。任选地，在该制剂中包含佐剂，如基于铝的佐剂。更特别 地，本发明提供了 13价肺炎球菌缀合物（13vpnc)组合物，其包含7vpnc疫苗（4、6b、9v、14、 18c、19f和23f)中的7种血清型加上6种额外的血清型（1、3、5、6a、7f*19a)。
[0009] 本发明还提供了多价免疫原性组合物，其中荚膜多糖来自肺炎链球菌的血清型1、 3、 4、5、6a、6b、7f、9v、14、18c、19a、19f 和 23f 并且载体蛋白是 crm197。
[0010] 本发明还提供了多价免疫原性组合物，其中荚膜多糖为肺炎链球菌的血清型1、3、 4、 5、6a、6b、7f、9v、14、18c、19a、19f和23f，载体蛋白是crm197，并且佐剂是基于铝的佐剂， 如磷酸铝、硫酸铝和氢氧化铝。在本发明的具体实施方案中，佐剂是磷酸铝。
[0011] 本发明还提供了多价免疫原性组合物，其包含多糖一蛋白质缀合物以及生理学上 可接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自肺炎链球菌的不同血清型的荚 膜多糖，并且所述荚膜多糖从血清型3和至少一种额外的血清型制备。
[0012] 在该多价免疫原性组合物的一个实施方案中，额外的血清型选自血清型1、4、5、 6八、68、7?、听、14、18(：、194、19?、和23?。在另一实施方案中，载体蛋白是0?1 197。在再一个 实施方案中，组合物包含佐剂，如选自磷酸铝、硫酸铝和氢氧化铝的基于铝的佐剂。在一个 具体实施方案中，佐剂是磷酸铝。
[0013] 本发明还提供了多价免疫原性组合物，其包含多糖一蛋白质缀合物与生理学上可 接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自肺炎链球菌的不同血清型的荚膜 多糖，并且该荚膜多糖从血清型4、68、听、14、18(：、19?、23?和至少一种额外的血清型制备。
[0014] 在该多价免疫原性组合物的一个实施方案中，额外的血清型选自血清型1、3、5、 6a、7f和19a。在另一实施方案中，载体蛋白是crm 197。在再一个实施方案中，组合物包含佐 剂，如选自磷酸铝、硫酸铝和氢氧化铝的基于铝的佐剂。在一个具体实施方案中，佐剂是磷 酸错。
[0015] 本发明还提供了诱导对肺炎链球菌荚膜多糖缀合物的免疫应答的方法，其包括对 人施用免疫有效量的前述任一种免疫原性组合物。
[0016] 本发明还提供了施用的任一种免疫原性组合物是单次的0. 5ml剂量，其经配制成 含有：除了 4yg 6b外，2yg每种糖；约29yg crm197载体蛋白；0.125mg元素铝（0.5mg磷 酸铝）佐剂；和作为赋形剂的氯化钠和琥珀酸钠缓冲剂。
[0017] 附图简述
[0018] 图1描绘了在美国年龄〈2岁的儿童从基线（1998/1999)到2001年按照血清型的 ito比率的改变。
[0019] 图2描绘了在〈5岁（1998)的儿童中具有青霉素（pcn)抗性的链球菌分离菌的分 布。
[0020] 图3描绘了来自d118-p16prevnar试验的第三次剂量后opa的倒数累积分布曲线 (rcdc)〇
[0021] 发明详述
[0022] prevnar 血清型 4、6b、9v、14、18c、19f、23f 的包括
[0023] 来自1995-1998年间ib)监视的数据估计prevnar中的7种血清型造成〈2岁年 龄的儿童中约82%的ipd[5]。在加利福尼亚北部功效试验地点，prevnar血清型占婴儿和 幼儿中所有ik)病例的90% [10]。自从在2000年引入prevnar疫苗，由于该疫苗血清型 引起的疾病的下降，总的iro率显著降低[3,4]。因此，在此时没有理由从下一代肺炎球菌 缀合疫苗除去任一种prevnar血清型，而是加入血清型以得到更宽的覆盖范围。
[0024] 血清型1、3、5和7f的包括
[0025] 在美国，5岁以下儿童中血清型1引起的ib)率〈2%，对于血清型3和7f的每一 种大概相同[1，6]。血清型1和5占具有侵入性肺炎球菌疾病的高危美国人口中ipd的较 高发病率。特别地，血清型1引起阿拉斯加〈2岁的本地儿童中3. 5%的ipd，和2 - 4岁儿 童中18%的ipd[11]。血清型1和血清型5在世界的其他地方和发达国家的土著人口中显 著致病[12, 13, 14]。
[0026] 与其他肺炎球菌血清型相比，血清型1也与更严重的疾病有关[15]。该观察是基 于美国和欧洲之间病例鉴定率的差异，和医疗实践中相关的差异。总体上，iro的发病率在 欧洲低于美国。然而，在欧洲血清型1引起的ipd的百分比不成比例地高于美国（分别为 6-7%与1-2%)。在欧洲，血液培养物主要从住院儿童得到。在美国，在门诊病人从发热 多39°c并且具有升高的白细胞数的儿童得到血液培养物是常规的医疗实践。考虑到医疗实 践的差异，推测在美国血清型1引起的疾病的较低百分比可以被引起较轻的疾病的其他血 清型的较高比率稀释，而欧洲的较高百分比反映了更严重的疾病。此外，具有并发肺炎的儿 童的血清流行病学研宄表明血清型1被不成比例地表示[16, 17, 18]。这提示血清型1的包 括可以降低严重肺炎球菌疾病的量，以及促进侵入性肺炎球菌疾病的总的减少。
[0027] 加入血清型3和7f将在世界上的多数地区增加对ipd的覆盖率约3% -7%，在 亚洲为约9%。从而，11价疫苗将覆盖亚洲中的约50%和所有其他地区中ipd的约80% [1，2]。这些血清型对于中耳炎覆盖率也是重要的[19]。在引起中耳炎的肺炎球菌血清型 的多国家研宄中，hausdorff等人发现血清型3是第8位最普遍的总体中耳液分离物[20]。 血清型3占与中耳炎相关的肺炎球菌血清型的高达8.7%。从而，在中耳炎以及iro中血清 型3和7f的重要性保证它们包括在肺炎球菌缀合物疫苗中。
[0028] 然而，产生关于血清型3多糖的显著免疫原性的多价肺炎球菌缀合疫苗的尝试 没有成功。例如，在11价肺炎球菌蛋白d缀合疫苗（il-pn-pd)的免疫原性和安全性研 宄中，在接受三剂疫苗接着接受相同疫苗或者肺炎球菌多糖疫苗的加强剂量的婴儿中没 有观察到血清型3的引发效果（nurkka等人（2004) ped. inf. dis. j.，23:1008-1014)。在 另一研宄中，来自已经接受11-pn-ro剂量的婴儿的调理吞噬测定（opa)没有显示出在与 其他测试的血清型相当的水平上对血清型3的抗体应答（gatchalian等人，17 th annual meeting of the eur. soc. paed. inf. dis. (espid), poster no. 4, pla poster session i, istanbul turkey, mar. 27, 2001)。在再一个研宄中，评估了 il-pn-pd在预防急性中耳炎 中的功效，疫苗没有提供对血清型3引起的发作的保护（prymula等人www. thelancet. com. vol. 367:740-748 (march 4, 2006))。因此，包含来自血清型3的荚膜多糖和能够引起对血 清型3多糖的免疫原性应答的肺炎球菌缀合疫苗提供了在本领域