的水质净化的微生物制剂。
[0029] 本发明的用于除臭的微生物制剂可以为粉末制剂或液体制剂，可以将上述微生物 粉末制剂悬浮于灭菌生理盐水中进行使用，或者可以直接将上述液体制剂喷洒到目标物 上，或者可以采用将上述液体制剂装入到容器中后置于产生恶臭的部位上的方法来使用， 但并不限定于此。
[0030] 本发明的用于鳗鱼养殖场的水质净化的微生物制剂可以为粉末制剂或液体制剂， 可以将上述微生物粉末制剂悬浮于灭菌生理盐水中进行使用，或者可以直接将上述液体制 剂喷洒到鳗鱼养殖场的水槽中进行使用，但并不限定于此。
[0031] 并且，本发明提供一种包括培养上述菌株的步骤的用于除臭及鳗鱼养殖场的水质 净化的微生物制剂的制备方法。本发明的培养菌株的方法可以使用本领域通常使用的方法 进行培养，优选使用平板计数琼脂培养基（plate count agar，pca)及胰化蛋白大豆培养基 (tryptic soy agar，tsa)，但并不限定于此。
[0032] 并且，本发明提供一种用上述菌株或其培养液对污水处理厂、畜舍、堆肥工厂或卫 生间进行处理，从而去除恶臭的方法。
[0033] 上述畜舍可以是饲养猪、牛、山羊等哺乳类，鲤鱼、金鱼等鱼类及野鸡、鸡、鸭、火鸡 等家禽类的场所，但并不限定于此。
[0034] 并且，本发明提供一种用上述菌株或其培养液对鳗鱼养殖场进行处理，从而净化 水质的方法。
[0035] 本发明中为了对鳗鱼养殖场进行处理，从而净化水质，可以直接将本发明的菌株 或其培养液对鳗鱼养殖场进行处理，也可以使用使水质净化效果进一步提高的方法，上述 方法为，同时将所述菌株或培养液以一定浓度加入到饲料中口服给鳗鱼进行养殖的方法， 但并不限定于此。
[0036] 下面根据实施例对本发明进行详细说明。下述实施例仅是为了例示本发明，本发 明的内容不被下述实施例所限定。
[0037] 〈实施例1>本发明的lactobacillus parafarraginis菌株的分离
[0038] 为了从植物中分离具有除臭活性的微生物菌株，用连续稀释法稀释由植物提供的 液体样本，将其涂抹到微生物分离用培养基上，在25°c下培养3-7天。微生物分离用培养基 使用了 pca，tsa，mrs(de man，rogosa，sharpe)及ym(酵母分离）琼脂培养基。在三种培 养基中出现了几乎相似的细菌，因为在乳酸菌分离培养基的mrs培养基中只能区分酵母和 细菌，因此只参考了其系数，微生物分离是考虑了 tsa及pca培养基中的各菌落的大小、形 态等后筛选出了 5?10个菌株。同样地，酵母也基于菌落的大小、形态及颜色等而筛选出 了 7个菌株。
[0039] 对菌株筛选方法更详细地进行说明如下。用连续稀释法稀释后，在微生物分离用 培养基中培养的12个菌株分别接种到胰化蛋白大豆培养基中，在25?45°c的温度下振荡 培养9?48小时，筛选出除臭活性最高，菌落数少的菌株，用超声波破碎仪纳米分离琼脂培 养基和绿茶提取物，在25?40°c温度下筛选9?40小时进行二次培养。
[0040] 〈实施例2>本发明的lactobacillus parafarraginis菌株的鉴定
[0041] 为了用分子生物学方法分离上述实施例1中筛选的菌株，利用16s rdna碱 基序列分析来进行鉴定。16s rdna碱基序列相似性分析结果，将其判定为属于乳酸菌 (lactobaciiius)属的细菌。现有的乳酸菌有140个种和9个亚种（以2010年12月为准）， 其中与lactobacillus parafarraginis标准菌株的16s rdna喊基序列显不出了 99. 731% 的非常高的相似度。（数据未提出）。此外，与乳酸菌泄洪闸（lactobacillus rapi)、希 氏乳杆菌（lactobacillus hilgardii)及类布氏乳杆菌（lactobacillus parabuchneri) 等标准菌株也显示出了 97%以上的高相似度。上述菌株16s rdna碱基序列分析是 1114bp，根据使用上述碱基序列的系统树图分析，本发明的菌株显示出与lactobacillus parafarraginis标准菌株形成同样的分支。以上述菌株为对象进行分析后获得的seq id no :1的dna碱基序列的同源性分析是利用ncbi blastn程序（http ://www. ncbi. nlm. nihgov/blast/)进行的，将其命名为 lactobacillus parafarraginis。
[0042] 〈实施例3>根据lactobacillus parafarraginis的处理的氨除臭活性分析
[0043] 为了确认本发明的菌株是否对氨具有除臭活性，调查了菌株处理后，随时间变化 的氨浓度。没有使用本发明的菌株进行处理的状态下进行试验的记载为作为对照组的空白 (blank)，使用包含本发明菌株的液体样本进行处理的标记为样品（sample)(表1)。样品是 将上述菌株使用蒸馏水稀释5倍后，将20ml放入51反应器中进行密封而得到。在空白及 样品中分别注入初期氨浓度为50 μ mol/mol的试验气体，温度维持在18?28°c，湿度维持 在40?60 %，在初期（0分种），30分钟，60分钟，90分钟及120分钟测量试验气体浓度。 试验气体的浓度通过探测管式气体测量仪（ks i 2218:2009)来进行测定（表1)。各时间 段试验气体的去除率按照以下公式计算；试验气体去除率（％) = [{(空白浓度）_(样品 浓度）}八空白浓度）]x 100。其结果，在空白中氨的浓度几乎没有变化，但在样品中，30分 钟后测量的氨浓度显著地减少到1 μ mol/mol，表现出了 98%的除臭率，可知在90分钟之后 几乎测定不到氨（图1)。这一结果表明，与现有的发明相比，能够在短时间内去除氨，因此 可以认为本发明的菌株具有优异的氨去除活性效率。
[0044] 表 1
[0045]
【主权项】
1. 一种具有除臭活性及饅鱼养殖场的水质净化功能的lactobacillus parafarraginis菌株（kctc12357bp)。
2. -种含有权利要求1所述的菌株或其培养液作为有效成分的用于除臭及鳗鱼养殖 场的水质净化的微生物制剂。
3. -种包括培养权利要求1所述的菌株的步骤的用于除臭及鳗鱼养殖场的水质净化 的微生物制剂的制备方法。
4. 一种用权利要求1所述的菌株或其培养液对污水处理厂、畜舍、堆肥工厂或卫生间 进行处理，从而去除恶臭的方法。
5. -种用权利要求1所述的菌株或其培养液对鳗鱼养殖场进行处理，从而净化水质的 方法。
【专利摘要】本发明提供一种具有除臭活性及鳗鱼养殖场的水质净化功能的lactobacillus parafarraginis菌株；一种含有上述菌株或其培养液作为有效成分的用于除臭及鳗鱼养殖场的水质净化的微生物制剂；一种包括培养上述菌株的步骤的用于除臭及鳗鱼养殖场的水质净化的微生物制剂的制备方法；一种用上述菌株或其培养液对污水处理厂、畜舍、堆肥工厂或卫生间进行处理，从而去除恶臭的方法；以及一种用上述菌株或其培养液对鳗鱼养殖场进行处理，从而净化水质的方法。kctc 12357bp20130123
【ipc分类】c02f3-34, c12r1-225, c12n1-20
【公开号】cn104603259
【申请号】cn201380010658
【发明人】李慧譞, 李承协, 李相钟, 金米姬
【申请人】领袖生物技术农业会社法人
【公开日】2015年5月6日
【申请日】2013年3月4日
【公告号】wo2013147426a1