细胞浓缩液的制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种制造细胞浓缩液的技术，该技术使用填充了中空纤维型分离膜的 细胞悬浮液处理器。
【背景技术】
[0002] 在细胞医疗的领域中，使用将从活体采集的细胞直接、或在活体外培养后，接种于 患者的方法。将这些用于治疗的细胞悬浮于适合治疗的溶液中，或调整为适当的浓度而移 植。但是，在从活体中采集细胞的情况下，有时对于治疗而言细胞浓度不足，另外，在将从活 体中采集的细胞在体外进一步培养的情况下，大多含有来源于组织的杂质及培养基等。因 此，为了将从活体中采集或培养的细胞用于治疗，需要去除杂质及培养基，使其成为在适合 治疗的溶液等中悬浮的状态（清洗），浓缩成适合治疗的细胞浓度。
[0003] 为了实现上述目的，已知使用离心分离的浓缩、清洗操作。例如，公开有一种为了 从人组织中分离再生细胞并浓缩而使用离心分离的方法（专利文献1)。但是，如上使用离 心分离的方法有由于装置大型化、对细胞施加负荷、以及成本增大而使可利用的设施受限 的担忧。还可以举出，在为了清洗细胞而去除通过离心分离使细胞沉淀后的细胞悬浮液的 上清时，细胞有可能暴露在大气中，造成污染等问题。
[0004] 与之相对，提出一种使用小型且简便的装置，即中空纤维型分离膜，的细胞悬浮液 的分离、过滤方法（专利文献2)。在使用中空纤维型分离膜浓缩细胞医疗用途的细胞悬浮 液时，为了减轻对细胞的损伤，需要在短时间内进行浓缩处理，而且，由于杂质、培养基成分 的分子量较大，因此认为增大中空纤维型分离膜的孔径较好。但是，若增大中空纤维型分离 膜的孔径，则会发生细胞导致的堵塞等，或者由于细胞在中空纤维型分离膜上的附着性增 加而导致在制备浓缩液的过程中细胞数降低的担忧。
[0005] 现有技术文献
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献1 :日本特表2007-524396号公报
[0008] 专利文献2 :日本专利第2928913号公报
【发明内容】
[0009] 发明所要解决的课题
[0010] 本发明的课题为解决在使用中空纤维型分离膜进行细胞浓缩液的制造中的上述 问题点。具体而言，提供一种细胞浓缩液的制造方法，该方法在浓缩细胞悬浮液时，即使中 空纤维型分离膜的孔径较大，也能在保持优异的细胞回收率的同时在短时间内浓缩细胞。 而且，提供一种可以高效地去除悬浮液中存在的蛋白质等杂质的细胞浓缩液的制造方法。 [0011] 用于解决课题的方案
[0012] 本发明人为了解决上述课题进行了潜心研宄，结果发现，即使中空纤维型分离膜 的孔径较大，也能够在将过滤流量及线速度保持在某一特定的范围时，保持优异的细胞回 收率，同时在短时间内制造细胞浓缩液，完成了本发明。
[0013] s卩，本发明涉及一种细胞浓缩液的制造方法，该方法使用内压过滤方式的细胞悬 浮液处理器，所述细胞悬浮液处理器具备：细胞悬浮液入口、滤液出口、细胞悬浮液出口、及 配置于该细胞悬浮液入口和细胞悬浮液出口之间的中空纤维型分离膜，其中，该中空纤维 型分离膜的总截面积为〇. 5cm2?i. 5cm2，该中空纤维型分离膜的内侧膜面积为0. 2m2以下， 在该中空纤维型分离膜的内侧流通的线速度为500cm/分钟?1200cm/分钟，从滤液出口排 出的初期过滤流量除以流入细胞悬浮液入口的流量所得的值为0. 4?0. 7。
[0014] 优选该中空纤维型分离膜的内径为300 μπι?1000 μπι。
[0015] 优选该中空纤维型分离膜的平均孔径为0,1 ym以上。
[0016] 优选该中空纤维型分离膜由聚砜类、聚烯烃类或纤维素类的材料制成。
[0017] 优选该中空纤维型分离膜由聚醚砜制成。
[0018] 优选细胞悬浮液为免疫细胞的细胞悬浮液。
[0019] 另外，本发明涉及一种细胞浓缩液的制造方法，该方法包括：将通过所述制造方法 得到的细胞浓缩液通过反复稀释和浓缩而进行清洗的工序，所述稀释利用不含细胞的液体 进tx ;以及，进一步浓缩的工序。
[0020] 另外，本发明涉及一种细胞的冷冻保存方法，该方法包括：将通过所述制造方法得 到的细胞浓缩液使用液氮进行冷冻保存的工序。
[0021] 发明效果
[0022] 根据本发明，在浓缩细胞悬浮液时，即使中空纤维型分离膜的孔径较大，也可保持 较高的细胞回收率，同时在短时间内制造细胞浓缩液。而且，本发明可以高效地去除悬浮液 中存在的蛋白质等杂质，可在无菌的封闭体系中进行处理，用本发明的方法制造的细胞浓 缩液可提供用于细胞治疗。
【附图说明】
[0023] 图1示出用于实施例的细胞悬浮液处理器。
[0024] 符号说明
[0025] 1.筒状容器
[0026] 2.机身部
[0027] 3.端部
[0028] 4.滤液出口
[0029] 5.中空纤维型分离膜的束
[0030] 6·开口端（虚线部）
[0031] 7.树脂层部（斜线部）
[0032] 8a.细胞悬浮液入口
[0033] 8b.细胞悬浮液出口
[0034] 9.盖部
【具体实施方式】
[0035] 下面，对本发明进行说明。
[0036] 本发明的细胞悬浮液处理器如图1所示，但并不限定于此。筒状容器1由笔直的 机身部2和其两侧的端部3、盖部9构成，在端部3处具备滤液出口 4。可以在一端具备该 滤液出口，也可以两端具备该滤液出口。在该例子中，在盖部9设有细胞悬浮液入口 8a、细 胞悬浮液出口 8b。在该筒状容器1的内部具有所装填的中空纤维型分离膜束5、在盖部9 的内部设有的树脂层部7、以及在端部3的内部所设有的与其相同的结构，其中，所述树脂 层部7在将中空纤维型分离膜束5固定于容器内部的同时形成了中空纤维型分离膜的开口 端6。该树脂层部7及开口端6形成了被盖部9 (或者端部3)盖住的结构，细胞悬浮液出入 口 8a、8b和滤液出口 4由构成中空纤维型分离膜的壁材隔开，成为不连续的结构。
[0037] 需要说明的是，为了便于说明，在图1所示的例子中，将各部分以称为筒状容器的 机身部2、端部3、盖部9的方式进行区别。在设计上，无论是盖部9与筒状容器的端部3为 一体，还是在筒状容器的机身部2和端部3由各自的配件形成的情况下，只要细胞悬浮液入 口与细胞悬浮液出口不被构成中空纤维型分离膜的壁材隔开而是连续的，而且，细胞悬浮 液出入口与滤液出口具备由构成中空纤维型分离膜的壁材隔开的结构，就可以采用各种结 构。
[0038] 在本发明的细胞悬浮液处理器中，优选将数十至数千根左右的中空纤维型分离膜 捆扎而成的束填充于筒状的容器内。另外，在本发明中，中空纤维型分离膜的配置可以为直 线状，也可以弯曲状，还可以是螺旋状，只要在细胞悬浮液入口和细胞悬浮液出口之间保持 中空纤维型分离膜的两端，对形状就没有特别限定。
[0039] 作为细胞悬浮液处理器的筒状容器的原料，可使用丙烯腈丁二烯苯乙烯三元共聚 物等丙烯腈聚合物；聚四氟乙烯、聚三氟氯乙烯、四氟乙烯和六氟丙烯的共聚物、聚氯乙烯 等卤化聚合物；聚酰胺、聚酰亚胺、聚砜、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯丙烯酸共聚 物、丙烯腈、丁二烯苯乙烯、聚苯乙烯、聚甲基戊烯等。特别优选具有耐灭菌性的原料，具体 而言，为聚丙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚酰亚胺、聚碳酸酯、聚砜、聚甲基戊烯、聚苯乙烯等。
[0040] 作为固定中空纤维型分离膜的树脂层部的原料，可以优选使用聚氨酯树脂、环氧 树脂、以及有机娃树脂等通常的粘接材料。<