专利名称：一种羊肚菌的栽培新方法
技术领域：
该发明技术属于生物技术领域，本发明涉及的是一种羊肚菌的栽培新技术新方法，是通过特殊工艺制作菌种，科学配方及先进的栽培技术，在大田用羊肚菌纯菌种播种栽培，通过控温、控湿、控光等方法栽培出羊肚菌。羊肚菌是一种非常珍稀名贵的食用菌，它主要生长在大山区森林之中，一年只长一次，由于受地区条件和资源等限制，产量很少，采集十分困难。目前市场售价每公斤1800 2000元，产品主要出口西欧国家，需大量货源。羊肚菌的作用羊肚菌是世界上很名贵的菌类，属高级营养滋补品，含丰富的蛋白质、多糖、碳水化合物，多种维生素和20多种氨基酸及微量元素。具有补肾、壮阳、补脑、提神的功能。对精肾亏损、阳萎不举、性功能减退、性欲冷淡有明显的作用。长期食用可防癌抗癌，抑制肿瘤、预防感冒、增强人体免疫力的效果，在医学上和保健上都有重要的开发价值。羊肚菌营养成份羊肚菌干鲜均可食用，风味独特、味道鲜美、嫩脆可口、营养极为 丰富。据测定羊肚菌含蛋白质22%、粗脂肪3. 82%、氨基酸高达20多种，含47. 47%，特别是对人体必需的8种氨基酸含量很高，占氨基酸总量的44. 14%，多种维生素及矿物质元素含量也极为丰富，被誉为食品之冠。羊肚菌既是宴席上的珍品，又是医药中久负盛名的良药，李时珍《本草纲目》记载羊肚菌用于治疗各种胃病。过去人们把羊肚菌作为敬献皇帝的滋补贡品，如今已成为出口西欧国家的高档食品，是一种不含任何激素，无任何副作用的天然保健品，是人类最理想的健康长寿食品。背景技术：
羊肚菌人工栽培研究早在1883年，英、美、法等国家开始了栽培研究，时过100多年都没有取得成功，直到1986年4月，美国一名大学教授rom ower第一个申报了美国羊肚菌人工栽培发明专利，当时这项技术震惊了全世界，遗憾的是他还未等到专利颁布的前几周，就被谋杀在旧金山，从此这项专利断绝了实施。两年后，1988年6月，美国另一名大学教授san ronaid(曾与rom ower教授当过助手)，又申报了美国羊肚菌人工栽培的发明专利，但这项专利已过10多年，仍然没有实现羊肚菌的商业化栽培。在我国，先后研究羊肚菌人工栽培的单位先超过i万多家，人们都看到了羊肚菌的高昂价格和市场前景非常诱人，不惜一切代价进行研究。可是羊肚菌生长有很多奥秘，人工栽培并不像普通食用菌那么简单，有很多单位都是以失败而告终。我国著名的食用菌专家，四川省绵阳市食用菌研究所朱斗锡教授，也是国内研究羊肚菌最早的人，他从1985年开始研究羊肚菌，1992年首次在野外利用纯菌种栽培成功，2000年在野外中试栽培取得了成功，获得了国家发明专利(专利号zl 00112812.4)。但这种方法还存在投资高，工序复杂，产量不稳定的因素，因此还无法实现野生羊肚菌在大田进行商业化栽培。近20多年来，朱斗锡教授主要精力放在羊肚菌的菌种研究和栽培技术管理上，目的是进一步降低生产成本，提高羊肚菌产量和质量。在他那种坚定不移的研究信心中，得到了很多朋友方面的资金帮助，前后共研究时间长达25年，终于使这个神奇的羊肚菌能在大田中栽培成功，成为国内外首次攻破野生羊肚菌能够大田商业化栽培成功的人，这既是一个振奋人心的消息，又具有很大发展前景的事业，他的羊肚菌大田商业化栽培成功，填补了
ー项世界空白。羊肚菌的人工栽培成功来之不易，是经过了 25年的研究，1000多亩的失败，500多万元的损失换来的。直到今天能够商业化栽培羊肚菌，还有ー些科学家不相信，他们一直认为“羊肚菌的人工栽培是ー个禁区，不可能栽培成功”。然而，我国著名的食用菌专家，四川省绵阳市食用菌研究所所长，高级工程师朱斗锡教授，用坚强的毅カ和执着的精神，从1985年就开始研究羊肚菌，他是我国最早研究羊肚菌获得成功的人。获得市政府科技进步奖，获得国家创新基金项目的支持，获得国家高技术发展“863”项目的支持。它不仅是ー项高精尖端技术，也是国内外唯一能够在大田进行商业化栽培的技木。由于野生羊肚菌稀少，人工栽培出菇难度较大，羊肚菌市场统货价格从1985年每公斤6元上升到2009年每公斤1800元，羊肚菌精品价格每公斤高达3000 4000元，25年 来羊肚菌的价格翻了 300多倍，而且产品还越来越紧俏，西欧国家需求量不断増大。但我国毎年野生羊肚菌收购总量不足300吨，其中80%的产品都卖到了法国、德国、意大利、英国、美国等欧美国家。国内市场一般很少看见，只有一些高级酒店和饭店有少量的羊肚菌。因此，仅靠野生羊肚菌难以满足需求，而且野生资源已逐渐枯竭，全世界只有几个国家有少量的野生，产量越来越少，市场需求量又越来越大，毎年野生羊肚菌出来后都发生抢购大战，产品十分紧俏。当前开展羊肚菌人工栽培是解决羊肚菌紧俏的唯一出路。近30多年来，国内外很多著名研究机构和企业都加入了羊肚菌的研究和开发之中，但羊肚菌不是普通菌类，特别是培育出菇困难，有很多奥秘难以破解，国外科学家历时100多年的研发，投入经费高达几十亿美元，结果还是存在不出菇或极少量的出菇，虽然也有室内栽培成功的报道，但出菇很不稳定，还无法投入大規模エ厂化生产。但是西欧很多国家还是没有放弃对羊肚菌的栽培研究，这是他们长期以来的愿望，因为西欧国家人非常喜欢羊肚菌，特别是以法国为主的羊肚菌消费市场，前景很大。因此，他们不惜一切代价仍在继续研究。朱斗锡专家经过25年成千上万次的对羊肚菌栽培方法进行反复摸索试验，通过远缘杂交技术，组织分离和选育出了羊肚菌的优良菌种，利用生物技术和科学配方，解决了羊肚菌在基因遗传及生理变异方面的一系列关键技术，采取物理刺激和二次播种方法，攻破了羊肚菌人工栽培长期以来不出菇的世界性技术难题，共投资580多万元，实现了羊肚菌大田商业化栽培的新技术，填补了ー项世界空白。人工栽培的羊肚菌和野生的羊肚菌完全一祥，没有本质上的区別，是通过野生基因分离、驯化，原本的保留了它的真菌生长和繁育特性，给它创造了有利的生长条件，扩大了菌丝的生长范围，提高了产量。经农业部食品检测中心化验，人工羊肚菌与野生羊肚菌营养成份完全相同，而且人工羊肚菌比野生羊肚菌外观好看，大小匀称，因此，售价还高于野生羊肚菌。成功之后国内外专家又认为“羊肚菌大田商业化栽培成功，不仅是中国创造的一个奇迹，也是世界上的ー个奇迹！这是全世界唯一的羊肚菌商业化栽培成功的技木”，也是世界上的先进水平！国内外很多商家要求进行技术转让或技术合作。朱斗锡发明的羊肚菌专利栽培技木，从人类不能栽培到成功，从亩产几十斤提高到几百斤，是一项投资低、产量高、收入大的项目，这是他一生的心血和汗水换来的，中央电视台二台和中央电视台七台分别在2012年4月19日和2012年5月29、30日进行了采访、报道，也是全国历史上羊肚菌的首次报道。2009年法国农业科学院philippe教授和法国france morilles sas公司christophe perchat总裁先生,来中国四川省绵阳市,参观了正在出燕的羊肚菌现场非常高兴，他们说法国和其它欧洲国家对羊肚菌研究了几百年都未成功，这次看到中国人商业化栽培羊肚菌的出菇现场很震惊，他们说这是世界上唯一的，也是世界上最先进的羊肚菌栽培技术，他们要求购买这项技术。2010 年，法国 france morilles sas 公司 christophe perchat 总裁先生出资 380万元，购买了羊肚菌最新的栽培技术，并签订了“中法羊肚菌更深层次的产学研及产业化创新合作”，充分利用“中国创造”和中国的“羊肚菌栽培新技术”，结合法国良好的气候条件，以及法国和西欧巨大的羊肚菌销售市场，把羊肚菌人工栽培项目做大做强，实现更大的经济效益和社会效益。
发明内容
一种羊肚菌的栽培新方法，其中包括①、羊肚菌的组织分离新方法；②、羊肚菌的生长条件要求控制新方法；③、羊肚菌的母种、原种配方及制作新方法；④、羊肚菌的原种原料配方及制作新方法；⑤、羊肚菌的栽培种原料配方及制作新方法；⑥、羊肚菌的栽培原料及配方工艺与新方法；⑦、羊肚菌的栽培大棚的材料要求及规格和光度要求管理新方法。本发明方法经专利检索，是前所未有的，也是国内外独创的方法，该方法完全与过去其它同类的栽培方法不同。本方法解决了羊肚菌过去无法在大田进行商业化栽培的世界技术难题，这是一项羊肚菌人工栽培的重大的技术突破，是一种成本很低，原料来源丰富，出菇较稳定、产量较高、质量较好的栽培新方法。本申请人经过多年的试验研究及不断创新，发明了一种适用于大田羊肚菌的新方法，它包括了羊肚菌的全人工栽培新技术，菌种分离制作和适应的环境培养条件和生长控制条件、培养基材料及科学配方、栽培方法、管理技术等一系列的创新技术。具体实施例方式本方法是在大田通过纯菌种播种，遮光保湿等措施下完成的，温度可控范围为10 20°c，空气相对湿度为90 95%，光照在150 500勒克司，培养基配方是植物有机物的粉末50 60%，加入15 20%的含碳源的有机物质，再加入20 30%的泥土成为生长合成培养基。生长基质操作方法是将合成培养基装入溶器中，通过100 120°c的高温灭菌，冷却后，在无菌条件下接入羊肚菌的菌种，菌种经培养生长成熟后，在进行大田播种栽培直至出菇收获。实施步骤细则如下(i)、羊肚菌菌种分离，采用当地的野生羊肚菌品种，选择正处于壮龄期的尖顶羊肚菌或美味羊肚菌品种，放在玻璃瓶中，趁新鲜时在无菌条件下进行及时分离。培养基配方栎木屑200g (煮汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，kh2p040. 5g，mgs040. 5g，水 1000ml, ph 值 7· 0。
操作方法栎木屑200g，加入ioooml清水，煮沸iomin左右，用两层纱布过滤、取汁；加入琼脂，继续加热至琼脂全部溶化；加入匍萄糖、kh2p04、mgs04，并将蒸发的水分补足至1000ml，调ph值为7.0，趁热装入试管内。每支试管装入1/5的培养基，塞上棉塞，包扎后，放入高压灭菌锅进行灭菌。灭菌方法压カ指针上升到o. 05磅时排冷气，使指针回到o. 00磅后，继续升温至
0.15磅时，維持i. 5h，让其自然冷却后趁热取出试管，摆放呈斜面，使培养基长度约占试管长度的2/3为宜，然后在自然条件下让其培养基表面余水干后使用。菌种分离方法羊肚菌采用组织分离法，将装有培养基的试管或三角瓶，以及新鮮羊肚菌和エ用具一起放入接种箱进行消毒灭菌。操作方法分离切取菌柄放在试管培养基上，放在15 18°c条件下培养。(2)、羊肚菌母种制作 培养基配方黄豆芽500g (煮汁)，白糖 20g,琼脂 20g, kh2po4o. 5g，mgso4o. 5g，vb1o. 5g，水 1000ml，ph 均为自然。操作过程按照上述母种分离的方法进行操作，培养基做好后，分别装入18 x 180mm或20 x 220mm试管的1/5，塞上棉塞进行灭菌，灭菌时间在i. 5磅压カ下维持
1.5h，放成斜面备用。接种接种时要求在接种箱内通过药物进行灭菌，从第一代纯母种中挑取黄豆大小一块带菌丝的培养基，放入空白斜面培养基上。母种只能转管一次，不能多接或多扩，否则会影响子实体生长。培养接种后放在15 18°c条件下培养1-2周后备用。(3)、羊肚菌原种制作培养基配方栎木屑75%，米糠或麦麸20%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土 2%，含水量65%, ph 自然；操作过程将上述配方混合均匀后，加入清水，使含水量达65%时即可装瓶。装瓶要求松紧一致，不能太紧，装至瓶肩为直，再将表面压平，洗去瓶壁内外沾染的培养基，然后塞上棉塞或用塑料薄膜封ロ，。灭菌高压灭菌在i. 5磅压カ下维持2h，常压灭菌在100°c保持6 8h，接种与培养接种在接种箱内，经消毒后，每支母种可接原种5瓶。接种后放在15 18°c条件下培养，15d左右菌丝可长满瓶底备用。(4)、羊肚菌栽培种制作栎木屑75%，米糠或麦麸20%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土 2%，含水量65% ；将配方混合均匀后，使含水量65%后装瓶、灭菌。如果采用常压灭菌待温度上升到100で时保持6 811。接种栽培种不宜在接种箱接种，可用接种室用蒸气法消毒接种，接种后放在18°c下经过15 20d左右的培养，菌丝长满瓶底后，就可以直接用于栽培或做成栽培袋。(5)、羊肚菌栽培袋制作培养基配方栎木屑75%，米糠或麦麸20%，白糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%，土2%，含水量65% ；
将拌好的料装入乙烯透明薄膜袋，厚度一般约o. 03 o. 05cm,直径22cm为宜，长度45cm，的袋子，要求松紧适当，不能装得太紧，料装得太紧会使菌丝生长缓慢或不长。装好后，袋子两头或一头套上硬塑料项圈，将塑料袋口薄膜翻出来塞棉塞或用海绵盖封口，也可用口圈将牛皮纸封上，再用橡筋扎紧，即可进行高温灭菌。灭菌方法一般采用土法灭菌或高压蒸汽灭菌两种方法。土法灭菌的蒸灶一定要密封严密，尽量减少冒气，待温度上升到100°c后继续保持8h以上，冷却后进行接种。若采用高压蒸汽灭菌，需 在i. 5磅压力下保持2h。接种方法将灭菌后的袋子和菌种、工用具一起放入接种室或接种箱内进行空气消毒。接种箱消毒灭菌可用甲醛与高锰酸钾进行，按照每立方米空间用钾醛10ml、高猛酸钾iog混合，产生气体进行灭菌。消毒30min后开始接种，接种时先将栽培种表面去掉，然后将菌种钩散，均匀的放入塑料袋两头的培养基上，每瓶栽培种可接栽培袋20 30袋。接种后的袋子可重叠排放，一般可重叠6 7层。根据温度高低可确定每行之间的距离，防止过密产生高温。接种后，最好在暗光条件下发菌培养，在培养过程中尽量避免翻动袋子，以减少杂菌从袋口进入。经过20 30d左右生长，菌丝可长满全袋，长满袋后及时播种使用。(6)、羊肚菌栽培播种方法将选好的大田用拖拉机翻耕后，先在大田中用绳子拉直洒上灰线，行宽为i. 2m，长度不限，也可根据地形确定。每行之间留人行道30cm，然后用锄头在播种行内铲横沟，横沟深度约5cm，宽度约10cm。铲好沟后，每平方米用种量掌握在一袋左右(约ikg)即可，播种后立即盖土。最好的方法是边铲沟、边播种、这样才能保持菌种的湿度。一般是铲第二沟的土用来掩盖前一沟的菌种，沟与沟之间约隔5cm左右。要求土壤要盖严、盖平整，盖土的厚度一般约5 8cm，并在盖土后把厢沟一便整理出来，播种行就成了出菇的厢体，厢沟就成了人行道，沟与厢的高度一般在10 15cm，厢做好以后，及时覆盖塑料薄膜保持土壤的湿度。(7)、羊肚菌管理技术羊肚菌播种后，管理技术是关系到羊肚菌的成功与失败的关键，尤其是温度和湿度的管理是致关重要的，是关系到有收无收，高产与低产的重要因素。羊肚菌播种后的管理，主要针对外界条件的温度、湿度、光照、空气、病虫害等五大因素进行科学管理，具体技术要求如下温度要求羊肚菌菌丝在3 22°c都能生长，但最好在低温下生长，温度最好控制在22°c以下，最适宜菌丝生长温度为12 18°c，湿度要求大田栽培羊肚菌掌握土壤的干湿度非常重要，在湿度管理过程中，一直要保持播种时土壤本身的湿度和菌种本身的湿度，不让菌种培养基的湿度和土壤的湿度因受外界气候干燥而散失水分，若发现表土发白变干时，可采取喷雾或洒水等保持表土润湿，要求空气相对湿度85 95%之间。光照要求羊肚菌适宜在阴凉、暗光、背风的环境下生长。菌丝生长阶段对光照要求不严，相反阴暗环境有利于生长。子实体生长需要一定的光照，适宜在三分阳七分阴的环境中生长，光照控制为300 500勒克司。空气要求栽培羊肚菌首先要选择空气新鲜、场地无污染的环境，尽量避免有灰尘、农药、放射性气体、异味的场地。羊肚菌子实体生长和其它食用菌一祥，需要足够的新鮮空气，co2浓度控制到o. 3%。酸碱度要求栽培羊肚菌培养基和覆土的ph值应掌握在5. o 8. 5范围内。无论是选择栽培场地的土壤环境，还是覆土的土质以及培养基的配方，都要控制到这个范围之内。本方法除了在野外大田中栽培，还可在大地、林中地上、果树下或人工荫棚栽培。 本发明的特点在于原材料来源丰富，生产成本低，エ序简单，产量高，质量好的特点，采用本方法完全可以栽培出羊肚菌，并已达到了发明的目的。
权利要求
1.一种羊肚菌的分离菌种新方法；其特征方法在于发明了它是用新鮮羊肚菌的子实体，在无菌条件下进行组织分离的方法，切取2-3mm直径的组织细胞，放在专用的pda培养基上，经特定环境条件下培养繁殖可获得菌种。
2.ー种羊肚菌的培养基制作新方法；根据权利要求i所述的方法，其特征方法在于发明了羊肚菌的pda培养基的制作エ艺与菌丝体发育生长环境条件，其温度在5-20°c的范围内，基物含水量60-65 %，羊肚菌的子实体生长特定环境，温度是5-20°c范围内，空气相对湿度是80-95%条件下才能生长。
3.ー种羊肚菌的母种制作新方法；根据权利要求2所述的方法，其特征方法在于发明了羊肚菌的pda母种配方及制作方法，培养基配方是；栎木屑200g (煮汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，kh2p040. 5g，mgs040. 5g，水1000ml，ph值7. 0，通过高温溶化、装管、高温灭菌、接种、培养可获得母种。
4.ー种羊肚菌的原种制作新方法；根据权利要求3所述的方法，其特征方法在于发明了羊肚菌原种培养基配方；用小麦50-60 %，麦麸10-15 %，细颗粒土壤20-25 %，石膏1-2%，过磷酸钙1-2%，含水量60-65%，装瓶、封ロ、灭菌。温度100-120°c，保持3-8小时。冷却后在无菌条件下接种可获得原种。
5.ー种羊肚菌的栽培种制作新方法；根据权利要求4所述的方法，其特征方法在于发明了羊肚菌栽培种培养基配方；用植物有机物70-80%，麦麸或米糠10-15%，石膏1%，石灰i %，含水量60-65%，装入17 x 33cm塑料袋中，封ロ、灭菌。常压100°c以上保持8小时，高压i. 5磅保持90分种，冷却后接种，在5-20°c的环境下培养20-30天可获得栽培种。
6.ー种羊肚菌的栽培袋制作新方法；其特征方法在于发明了使用6针遮阳网搭成大棚，规格(长x宽x高)10-30mx4-8mx1.6-2. 2m的拱形或平形遮阳网大棚，遮光度达到80-90%,通过其它管理相结合直至出菇收获。
7.ー种羊肚菌的栽培播种新方法；根据权利要求5所述的方法，其特征方法在于发明了羊肚菌的播种栽培方法；利用稻田或山坡地，播种栽培，通过耕作后，再对土壤进行高温灭菌、消毒。每平方米用羊肚菌栽培菌种500克，每隔i. 2-1. 5米ー厢开小沟，用塑料薄膜覆盖保温，保湿。外搭建荫棚，用稻草帘或遮阳网遮光70-90 %，通过特定的环境条件管理至出菇收获。
全文摘要
本发明涉及一种羊肚菌的栽培新方法，它是将野生羊肚菌通过组织分离等方法获得菌种，再将菌种制作成母种、原种、栽培种等菌种，通过一系列的创造发明，成功地栽培出了羊肚菌。在栽培中发明了羊肚菌的菌种原料与配方及制作方法；栽培工艺流程及栽培新方法。发明了它的栽培环境条件控制要求，发明了羊肚菌人工纯化的菌种研制，创造发明的控温、控湿、控光等方法条件培育出羊肚菌。发明了羊肚菌生长基质有机物，加入辅助营养物质，再加入泥土，构成合成的培养基质，在无菌条件下接入羊肚菌的纯菌种。通过特殊的播种方法栽培，经过技术管理可收获羊肚菌。本方法独特，是国内外同行中未有的先进方法，完全达到了发明的目的。
文档编号a01g1/04gk102823429sq201210339140
公开日2012年12月19日 申请日期2012年9月3日 优先权日2012年9月3日
发明者朱斗锡, 何荣华 申请人:朱斗锡, 何荣华