原儿茶酸在提高畜禽免疫功能中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制药技术，具体涉及原儿茶酸在提高畜禽免疫功能中的应用。
【背景技术】
[0002] 原儿茶酸(protocatechuic acid，pca)，化学名称为3,4-二羟基苯甲酸，其基本的 信息为cas: [99-50-3]，分子式：（h0)2c6h3c00h，分子量：154.12。是一种重要的酚酸类化合 物，具有多重药理作用，能够提高抗病毒药物疗效，又有消炎和组织损伤修复的效果。
[0003] 然而，原儿茶酸关于改善细胞功能(特别是t淋巴细胞)和抗病毒活性方面的报道 较少。在改善细胞功能方面，miroslavastankovid等报道富含酸酸类化合物(包含原儿茶 酸）的葡萄籽提取物对阻止由r0s所致的氧化性淋巴细胞损伤有非常好的效果，而 gcxtevacd等则表明葡萄籽提取物以及分离得到的原儿茶酸具有保护人类淋巴细胞dna免 受损害的作用。zhou-stache j更是用实验数据直接证实原儿茶酸可以通过激活nf-κβ信号 传导通路来达到对人脐静脉内皮细胞和jurkat细胞的细胞保护作用。抗病毒方面的研究则 主要集中在抗乙型肝炎病毒和禽流感病毒的研究上。原儿茶酸对于hep g2.2215细胞系中 的hbv复制有较强的抑制作用，且该抑制效果可能与直接抑制病毒dna有关。另外，原儿茶酸 氧化多聚体0p-pca和腐殖酸在无毒浓度范围下能够抑制流感病毒a/wsn/33(h1n1)在mdck 细胞上的增殖，而原儿茶酸单体却没有抑制病毒增殖的作用；欧长波等通过禽流感小鼠模 型也证明原儿茶酸在10-40mg/kg体重剂量下可以有效提高小鼠成活率。
[0004] 原儿茶酸的研究主要集中在药理作用方面，对于免疫功能的研究相对较少，本专 利从免疫功能入手，解释原儿茶酸促进畜禽免疫功能的分子机制。
【发明内容】
[0005] 为了解决现有技术的不足，本发明提供了原儿茶酸在提高畜禽免疫功能中的应 用。
[0006] 本发明的技术方案是:提供了原儿茶酸在提高畜禽免疫功能中的应用以及原儿茶 酸在制备提高畜禽免疫功能药物中的应用。
[0007] 本发明的进一步改进包括：
[0008] 所述的畜禽是鸡、猪、牛或羊。
[0009] 所述的畜禽是家禽或家畜。
[0010] 所述原儿茶酸可以改善畜禽体内外周血⑶4 /⑶8 t细胞动态平衡。
[0011] 所述原儿茶酸可以有效调节胸腺组织中细胞因子分泌。
[0012] 所述原儿茶酸可以提高il-2、il-10和ifn-α基因表达含量，降低il-8基因表达含 量。
[0013] 原儿茶酸与畜禽用药配伍制成的颗粒剂、口服液、粉剂或片剂剂型，或者与畜禽各 种用药配伍制成的复方制剂以及预混剂。
[00?4]有效剂量的原儿茶酸不低于5mg/kg体重。
[0015] 本发明是提供原儿茶酸的新用途，即在促进畜禽免疫功能方面，特别是维持畜禽 外周血cd4 /cd8 t细胞动态平衡、调节细胞因子分泌等方面的新应用。
[0016] 本发明评价了原儿茶酸对家禽免疫功能，特别是对t细胞分化的影响，按照每公斤 体重20毫克原儿茶酸给药，连续口服7天，结果表明原儿茶酸可以有效提高外周血cd4 t/ cd8 t比值，促进胸腺和脾脏中细胞因子分泌，对免疫系统相关基因选择性调节。
[0017] 本发明进一步提供了一种含有有效剂量原儿茶酸的畜禽免疫促进剂，可以加入药 用辅料按照本领域的常规制剂方法制备成各种剂型，如粉剂、片剂、颗粒剂、口服液。有效剂 量在5-40毫克每公斤体重，拌料或者饮水给药。
[0018] 此外，还可以将原儿茶酸与其它药物联合给药。
【具体实施方式】
[0019] 下面结合实施例对本发明做详细说明。
[0020] 实施例1原儿茶酸对家禽免疫功能的影响
[0021] 将40和20mg/kg体重剂量的pca饲喂21日龄spf鸡，连续饲喂7天，无菌取外周血和 胸腺，分离淋巴细胞，通过流式细胞仪检测cd4 t/cd8 t比例;计算胸腺、脾和法氏囊器官指 数；胸腺和法氏囊立即冻存于液氮，进行转录组测序；同时检测胸腺和脾脏中tgf、il-12、 il-10、il-8、il-6、il-4、il-2tnf、mhc-1、mhc-2、ifn-α、ifn- γ、il-15和mda5的mrna水平。
[0022] 1.器官指数
[0023]表1原儿茶酸处理对体重和器官指数的影响
[0024]
[0025]表1显示了饲喂药物7天后对spf鸡体重和器官指数的影响，结果表明原儿茶酸 40mg/kg组、20mg/kg组、空白对照组的增重率分别为77 %、61 %、60 %。原儿茶酸两组可以显 著提高胸腺指数，20mg/kg组也可以显著提高法氏囊指数，降低了脾脏指数。
[0026] 2.流式结果
[0027] 表2原儿茶酸处理对体重和器官指数的影响
[0028]
[0029] 20mg/kg原儿茶酸药物饲喂7天后，外周血cd4 /cd8 比值却发生了比较大的变化， 原儿茶酸组⑶4/⑶8比值达到2.4±0.4,显著高于空白对照组的1.3±0.3(p〈0.01);胸腺中 ⑶4 /⑶8 比值相对于空白对照组略微提高。
[0030] 3.测序结果
[0031] 对胸腺和法氏囊进行转录组测序，结果发现，连续饲喂原儿茶酸7天以后，通过高 通量测序与鸡全基因组进行比对分析发现，胸腺中差异表达基因343个，其中下调基因247 个，上调基因96个;法氏囊中差异表达基因520个，其中下调基因282个，上调基因248个。
[0032] 经g0富集分析可知，胸腺中差异表达基因主要集中于蛋白、糖类以及抗原结合等 分子生物学功能、调控细胞增殖等生物学过程;法氏囊中差异表达基因主要集中于mhc-i、 mhc-ii和血红蛋白复合体等细胞成分、肽抗原、离子通道、亚铁血红素、抗原结合等分子功 能、t细胞介导的细胞毒性反应调控、免疫应答、mhc-i介导的肽抗原递呈以及抗原处理与递 呈等生物学过程。
[0033]经kegg富集分析，法氏囊中差异基因主要涉及ecm受体互动和点状黏附等通路。 [0034] 4.细胞因子结果
[0035] 用定量pcr 方法检测 tgf、il-12、il-10、il-8、il-6、il-4、il-2tnf、mhc-1、mhc-2、 ifn-α、ifn-γ、il-15和mda5等基因在胸腺和脾脏中的表达量，结果发现原儿茶酸可以显著 提高胸腺中il-2、il-10和ifn-a基因表达含量，降低il-8基因表达含量;对脾脏中基因表达 含量差异不显著。
[0036] 实施例2原儿茶酸对家畜免疫功能的影响
[0037] 随机挑选20头喂断奶仔猪，分为pca组和健康对照组，pca按照20mg/kg体重剂量的 拌料连续饲喂7天，分别无菌取外周抗凝血，进行流式细胞术检测。
[0038] 结果显示，20mg/kg原儿茶酸药物饲喂7天后，外周血⑶4 /⑶8 比值却发生了比较 大的变化，原儿茶酸组⑶4/⑶8比值达到1.9 ± 0.2，显著高于健康对照组的1.2 ± 0.2 (p〈 0·01)〇
[0039]以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变 化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其 等效物界定。
【主权项】
1. 原儿茶酸在提高畜禽免疫功能中的应用。2. 原儿茶酸在制备提高畜禽免疫功能药物中的应用。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的畜禽是鸡、猪、牛或羊。4. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的畜禽是家禽或家畜。5. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述原儿茶酸可以改善畜禽体内外周 血⑶4 /⑶8 t细胞动态平衡。6. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述原儿茶酸可以有效调节胸腺组织 中细胞因子分泌。7. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述原儿茶酸可以提高il-2、il-10和 ifn-α基因表达含量，降低il-8基因表达含量。8. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，原儿茶酸与畜禽用药配伍制成的颗粒剂、 口服液、粉剂或片剂剂型，或者与畜禽各种用药配伍制成的复方制剂以及预混剂。9. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，有效剂量的原儿茶酸不低于5mg/kg体重。
【专利摘要】本发明公开了原儿茶酸的新用途，即在促进畜禽免疫功能方面，特别是维持畜禽外周血cd4 /cd8 t细胞动态平衡、调节细胞因子分泌等方面的新应用。本发明评价了原儿茶酸对家禽免疫功能，特别是对t细胞分化的影响，按照每公斤体重20毫克原儿茶酸给药，连续口服7天，结果表明原儿茶酸可以有效提高外周血cd4 t/cd8 t比值，促进胸腺和脾脏中细胞因子分泌，对免疫系统相关基因选择性调节。本发明进一步提供了一种含有有效剂量原儿茶酸的畜禽免疫促进剂，可以加入药用辅料按照本领域的常规制剂方法制备成各种剂型，如粉剂、片剂、颗粒剂、口服液。有效剂量在5-40毫克每公斤体重，拌料或者饮水给药。
【ipc分类】a61p37/04, a61k31/192
【公开号】cn105616394
【申请号】cn201610107537
【发明人】欧长波, 王秋霞, 余燕, 张艳红, 姜金庆, 姚四新, 崔艳红, 马金友, 胡建和, 刘兴友
【申请人】河南科技学院
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年2月25日